2015版藥典關(guān)于蜂蜜相關(guān)測(cè)定的液相色譜解決方案

為了對(duì)應(yīng)2015版藥典——蜂蜜相關(guān)測(cè)定，德世科技為您解析液相色譜法檢測(cè)蜂蜜中各種成分的方法所用儀器耗材?？梢詭椭鷱V大藥物分析者特別是各藥檢所中藥室、中藥企業(yè)解決在分析檢測(cè)蜂蜜中遇到的問題。

   2015 版《中國(guó)藥典》一部中規(guī)定了蜂蜜中寡糖、5-羥甲基糠醛、及營(yíng)養(yǎng)成分果糖、葡萄糖的測(cè)定。對(duì)余這三項(xiàng)的測(cè)定說明如下：

一  寡糖的測(cè)定--目前市場(chǎng)出現(xiàn)的假蜂蜜中常添加大量糖漿，含有較多寡糖成分。通過檢測(cè)蜂蜜樣品是否出現(xiàn)寡糖，能快速鑒定摻假蜂蜜。藥典規(guī)定寡糖的測(cè)定采用薄層色譜法，前處理需要用一種特殊的固相萃取小柱，德世科技現(xiàn)已可為客戶提供成品固相萃取小柱5010-SPE6252-AC SpecialSPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 硅藻土/500mg 活性碳/200mg 硅藻土/6ml，30/p，*藥典要求。

二  5-羥甲基糠醛--羥甲基糠醛是衡量蜂蜜新鮮度的一項(xiàng)重要指標(biāo)，其含量越少，表明蜂蜜越新鮮。蜂蜜貯存和加工過程中溫度越高，時(shí)間越長(zhǎng)，產(chǎn)生的羥甲基糠醛就越多，它的含量高，標(biāo)志蜂蜜貯存環(huán)境或加工工藝不合理，或者蜂蜜中有摻假。 5-羥甲基糠醛極性較大，適合用液相色譜柱 5020-89731 InertSustain AQ-C18 5um，4.6*250mm 分析。

三  果糖、葡萄糖—為蜂蜜中的營(yíng)養(yǎng)成分。藥典中推薦使用Prevail Carbohyrate ES 色譜柱，此為聚合物基質(zhì)氨基液相色譜柱

2015 版藥典中對(duì)以上三項(xiàng)規(guī)定的測(cè)定方法如下：

 【檢查】

寡糖

取本品2g，置燒杯中，加入10ml 水溶解后，緩緩加至活性炭固相萃取柱（在固相萃取空柱管底部**一個(gè)篩板，壓緊，置固相萃取裝置上。稱取硅藻土0.2g，加水適量混勻，用吸管加至固相萃取柱管中，自然沉降形成3μm 厚的硅藻土層，打開真空泵吸引，稱取活性炭0.5g 加10ml 水?dāng)嚢?，混勻，用吸管加入，在真空泵的吸引下使活性炭沉降，?dāng)水面接近活性炭層面時(shí)，再次注入0.2g 用水混勻的硅藻土（蜂蜜中寡糖測(cè)定固相萃取小柱：5010-SPE6252-ACSpecial SPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 硅藻土/500mg 活性碳/200mg 硅藻土/6ml，30/p），在真空泵的吸引下，以1 秒/滴的速度用25ml的水預(yù)洗，當(dāng)液面到達(dá)柱面上2μm 時(shí)關(guān)掉**，再壓入上篩板，備用）中，打開**，在真空泵的吸引下，使

溶液通過柱子，待液面下降到柱面以上2μm 時(shí)，用7%乙醇25ml 洗脫，棄去洗脫液。再用50%乙醇l0ml 洗脫，收集洗脫液，置65℃水浴中減壓濃縮至干，殘?jiān)?0%乙醇1ml 使溶解，作為供試品溶液。另取麥芽五糖對(duì)照品，加30%乙醇制成每1ml 含1mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0512）試驗(yàn)，吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各3ml，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正丙醇-水-三乙胺（60：30：0.7）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液（取二苯胺1g，苯胺1ml，磷酸5ml，加丙醇至50ml，混勻），加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置的下方，應(yīng)不得顯斑點(diǎn)。

 5-羥甲基糠醛 照液相色譜法（通則0512）測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（液相色譜柱：5020-89731 InertSustainAQ-C18 5um，4.6*250mm）；以乙腈-0.1%甲酸溶液（5：95）為流動(dòng)相；5-羥甲基糠醛檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm，鳥苷檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按鳥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備 取鳥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加10%甲醇制成每1ml 含鳥苷0.2mg 的溶液，即得。另取5-羥甲基糠醛對(duì)照品適量，加10%甲醇制成每1ml 含4μg 的溶液，作為定位用。供試品溶液的制備 取本品1g，置燒杯中，精密稱定，加10%甲醇適量溶解，并分次轉(zhuǎn)移至50ml 量瓶中，精密加入鳥苷對(duì)照品溶液1ml，加10%甲醇至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定；另取鳥苷對(duì)照品溶液，5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，用以確定供試品色譜中5-羥甲基糠醛及鳥苷的色譜峰；以鳥苷對(duì)照品計(jì)算含量并乘以校正因子0.340 進(jìn)行校正，即得。本品含5-羥甲基糠醛，不得過0.004%。蔗糖和麥芽糖照〔含量測(cè)定〕項(xiàng)下方法測(cè)定，分別計(jì)算含量。本品含蔗糖和麥芽糖分別不得過5.0%。

液相色譜儀配置

P230II梯度HPLC系統(tǒng)     北京德世科技

單系統(tǒng)基本配置：

⑴ P230II高壓恒流輸液泵

⑵ UV230II型紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器

⑶ Rheodyne 7725i 高壓六通進(jìn)樣閥

⑷ ZJ-1閥及色譜柱支架

⑸ TD-1-15梯度混合器

⑺ EC2006色譜處理系統(tǒng)軟件（不含打印機(jī)、計(jì)算機(jī)）

⑻ P230II梯度系統(tǒng)啟動(dòng)包

 【果糖、葡萄糖含量測(cè)定】照液相色譜法（通則0512）測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以Prevail Carbohyrate ES（聚合物基質(zhì)液相色譜柱：SHO-F7630001 Asahipak NH2P-50 4E 250MMx4.6MM）為色譜柱，以乙腈-水（75：25）為流動(dòng)相；示差折光檢測(cè)器檢測(cè)。理論板數(shù)按果糖峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密稱取果糖對(duì)照品1.0g，葡萄糖對(duì)照品0.8g，置同一具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，搖勻，作為果糖、葡萄糖對(duì)照品儲(chǔ)備液。另精密稱取蔗糖對(duì)照品0.2g，麥芽糖對(duì)照品0.2g，置同一具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈10ml，溶解，搖勻，作為蔗糖、麥芽糖對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取果糖、葡萄糖對(duì)照品儲(chǔ)備液和蔗糖、麥芽糖對(duì)照品儲(chǔ)備液，加40%乙腈配成不同濃度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖混合對(duì)照品溶液。每一濃度溶液配制中，儲(chǔ)備液的用量和稀釋體積見2015 版藥典P360。精密吸取混合對(duì)照品溶液各15μl，注入液相色譜儀，分別測(cè)定。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱

坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。供試品溶液的制備 取本品約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 精密量取供試品溶液15μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。

本品含果糖（C6H12O6）和葡萄糖（C6H12O6）的總量不得少于60.0%，果糖與葡萄糖含量比值不得小于1.0。

液相色譜儀配置 

P230II高壓恒流泵      北京德世科技

1） 雙柱塞往復(fù)串聯(lián)泵

2） 流量范圍：0.001mL/min-9.999mL/min, 設(shè)定步長(zhǎng)：0.001mL/min

3） 流量準(zhǔn)確度：≤±0.3% (1.000ml/min, H2O,室溫,8.5MPa)

4） 流量穩(wěn)定性：RSD≤0.1% (1.000ml/min, H2O,室溫,8.5MPa)

5） 高工作壓力：42MPa(0.001mL/min—5.000mL/min)

20MPa(5.001mL/min—9.999mL/min)

6） 顯示壓力誤差：≤±3.0%

7） 壓力脈動(dòng)：≤1.0%

8） 電源：AC 110V/220V, 50Hz/60Hz

9） 功耗：180W

10） 外形尺寸（長(zhǎng)×寬×高）：420mm×280mm×175mm

11） 流量準(zhǔn)確度校正

12） 內(nèi)外控互換模式

13） Psi,Mpa,bar壓力單位顯示任選

RI-201H示差折光檢測(cè)器（*）

Rheodyne7725i高壓進(jìn)樣閥

A/D適配器

ZJ-1閥及色譜柱安裝支架

P230配RI-201H示差折光檢測(cè)器啟動(dòng)包

所用耗材

北京德世科技有限公司  提供2015版藥典 蜂蜜檢測(cè)液相色譜 儀器設(shè)備及耗材相關(guān)產(chǎn)品